山羊免疫球蛋白M(IgM)ELISA试剂盒反应的要素有哪些呢？
参加PCR反应的物质主要可以分为五种即：引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
今天我们重点来讲解下引物：所谓引物是PCR特异性反应的关键，PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
①引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。 ?、谝锢┰隹缍龋?以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
?、垡锛罨篏+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
?、鼙苊庖锬诓砍鱿侄督峁?，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
?、菀?'端的碱基，特别是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
?、抟镏杏谢蚰芗由虾鲜实拿盖形坏?， 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
?、咭锏奶匾煨裕阂镉τ牒怂嵝蛄惺菘獾钠渌蛄形廾飨酝葱?。
引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。
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